4ª Practica

4ª Practica

EXTRACCIÓN DEL ADN

MATERIALES

Visceras de pollo Agua (destilada o mineral) Sal de mesa Bicarbonato sódico Detergente líquido o champú Alcohol isoamílico a 0ºC Nevera Colador o centrífuga Vaso Tubo de ensayo Varilla fina Mortero

FUNDAMENTOS

La extracción de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolución y posterior extracción de la célula. 

Se empieza por romper las células mediante una disolución tampón en la que se disuelve el ADN. En ese momento, el tampón contiene ADN. Las proteínas asociadas al ADN, de gran longitud, se habrán fraccionado en cadenas más pequeñas y separado de él por acción del detergente. Sólo queda, por tanto, extraer el ADN de esa mezcla de tampón y detergente, para lo cual se utiliza alcohol isoamílico, probablemente el único reactivo de esta práctica que no suele haber en una cocina.

TÉCNICA

1. Preparar el tampón con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en un baño de hielo triturado:
• 120 ml de agua, si es posible destilada y si no mineral. No usar agua del grifo.
• 1,5 g de sal de mesa
• 5 g de bicarbonato sódico.
• 5 ml de detergente líquido o champú.
2. Elegir la muestra que va a proporcionar el ADN, en nuestro caso las visceras de pollo 
3. Triturar la muestra con un poco de agua en el mortero. Así se romperán muchas células y otras quedarán expuestas a la acción del detergente.
4. Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampón frío y agitar  2 minutos. Separar después los restos  más grandes del caldo molecular haciéndolo pasar por un colador lo más fino posible.
5. Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y añadir con pipeta 10 ml de alcohol isoamílico enfriado a 0ºC. Dejemos dejar que caiga sobre la pared del tuvo, de esta manera el alcohol quedará flotando sobre el tampón
6. Introducir lentamente la varilla y remover suavemente.

RESULTADOS

Vísceras de pollo

Vísceras trituradas con agua

Colador

Resultado después de agitar los 2 minutos

Resultado final

El "hilo" que podemos observar se corresponde con el ADN que hemos conseguid extraer.